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摘要：目的:構(gòu)建攜帶人腫瘤壞死因子樣微弱凋亡誘導(dǎo)劑(hTWEAK)基因的慢病毒表達(dá)載體,體外包裝成病毒顆粒,并分析其感染人肝癌細(xì)胞HepG2后TWEAK的表達(dá)情況。方法:以pORF5-TWEAK為模板,采用普通PCR擴(kuò)增TWEAK基因,通過(guò)酶切、連接等步驟構(gòu)建Plentilox3.7-TWEAK重組質(zhì)粒,利用酶切和測(cè)序的方法對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行鑒定。在293T細(xì)胞中包裝含TWEAK基因的慢病毒顆粒并感染HepG2細(xì)胞,采用熒光定量PCR和Western-blot檢測(cè)TWEAK表達(dá)水平,并通過(guò)間接免疫熒光(IMF)檢測(cè)其細(xì)胞表達(dá)定位。結(jié)果:酶切與測(cè)序結(jié)果證明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功,并能在293T細(xì)胞中與病毒包裝質(zhì)粒成功包裝病毒顆粒。病毒轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞中,TWEAK基因mRNA表達(dá)量約為對(duì)照組的500倍,TWEAK蛋白表達(dá)量明顯高于對(duì)照組,且主要定位于胞漿。結(jié)論:本研究成功構(gòu)建了含人TWEAK基因的慢病毒表達(dá)載體,其可在人肝癌細(xì)胞系HepG2中穩(wěn)定表達(dá),為后續(xù)的功能學(xué)研究打下了基礎(chǔ)。