高滴度慢病毒制備及其感染人原代T細胞的條件優化
作者：歐陽寒梅; 羅丹; 王欣; 劉雯; 游露; 代正群; 楊艷; 葉鑫宇; 鄒強 成都醫學院基礎醫學院; 成都610500; 成都醫學院科研實驗中心; 成都610500
摘要：目的為提高T細胞的感染率,探究高滴度慢病毒的制備、保存及感染T細胞的較佳條件。方法本研究使用二代和三代慢病毒包裝系統搭配二代和三代慢病毒載體、相同載體不同啟動子制備慢病毒濃縮后,用不同保存條件的慢病毒感染Jurkat細胞和不同活化程度的T細胞,然后用流式細胞儀檢測,進一步計算出病毒滴度和感染率。結果三代慢病毒包裝系統搭配三代慢病毒載體pLVX-EGFP包裝慢病毒滴度較高;EF-1a啟動子的載體優于CMV啟動子的載體;病毒在4℃存儲1d和在-80℃凍融1次滴度下降低于10%,在4℃存儲2d以上和在-80℃凍融兩次以上滴度下降超過35%;T細胞活化后才能被慢病毒感染;T細胞活化后較佳感染時相點為活化后24h。結論EF-1a啟動子的載體優于CMV啟動子的載體;病毒不要反復凍融;T細胞活化后24h轉導慢病毒轉到效率較高。
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成都醫學院學報雜志
成都醫學院學報雜志， 雙月刊，本刊重視學術導向，堅持科學性、學術性、先進性、創新性，刊載內容涉及的欄目：論著、指南解讀、綜述等。于2006年經新聞總署批準的正規刊物。
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