人膠質細胞源性神經營養因子基因片段克隆及其在大腸桿菌中的表達
作者：劉亞珍 施雨露 王友聯 劉永茂 萬全 吉林大學第一醫院藥劑科 長春130021 吉林大學白求恩醫學院實驗中心 長春130021 白求恩醫科大學制藥廠 長春130021 吉林大學生命科學學院08級生物技術系 長春130021
摘要：目的在大腸桿菌中表達具有生物活性的人膠質細胞源性神經營養因子（glial cell linederived neurotrophic factor, GDNF）蛋白。方法從人膠質瘤組織中提取總RNA，采用逆轉錄聚合酶鏈反應（reverse transcription PCR，RT—PCR）方法擴增出GDNFDN段，并將經雙酶切后的GDNF基因片段直接與表達載體pET28a＋連接，構建重組表達載體pET28a＋GDNF，再將其轉入大腸桿菌BL21中進行異丙基-β—D一硫代半乳糖苷誘導表達；采用分子篩層析法對表達產物進行純化；用十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）對其純度進行鑒定。結果酶切和測序證實，PCR擴增出GDNF基因片段為GDNF成熟肽編碼序列；表達產物的SDS—PAGE顯示，相對分子質量16000處有一新增蛋白帶。結論本研究所構建的原核表達系統可表達人GDNF。
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國際生物制品學雜志
國際生物制品學雜志， 雙月刊，本刊重視學術導向，堅持科學性、學術性、先進性、創新性，刊載內容涉及的欄目：病毒專題、疫苗研究、治療制品、生物信息、綜述等。于1978年經新聞總署批準的正規刊物。
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