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摘要：類鈣調(diào)磷酸酶B亞基蛋白(calcineurin B-like proteins, CBLs)為近年來新發(fā)現(xiàn)的一類植物Ca2+傳感器蛋白,能與其互作的蛋白激酶(CBL-interacting protein kinases, CIPKs)選擇性特異結(jié)合,在調(diào)控植物響應(yīng)非生物脅迫信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要的作用。為了鑒定葡萄屬(Vitis)植物CBLs基因參與逆境脅迫的功能特點(diǎn),以抗寒種質(zhì)山葡萄’左山-1’(Vitis amurensis’Zuoshan-1’)為試材,采用同源克隆獲得了類鈣調(diào)磷酸酶B蛋白家族成員VaCBL01基因。分析其序列與結(jié)構(gòu)表明,VaCBL01基因(GenBank No. MH921999) ORF為642 bp,編碼213個(gè)氨基酸,有4個(gè)EF-hand保守結(jié)構(gòu)域,蛋白N端具有豆蔻酰化位點(diǎn)。VaCBL01位于葡萄第2條染色體的5 571 989~5 581 623基因座。系統(tǒng)進(jìn)化聚類分析表明,VaCBL01與歐洲葡萄(Vitis vinifera)、擬南芥(Arabidopsis thaliana)、番茄(Solanum lycopersicum)和毛果楊(Populus trichocarpa)中CBL01蛋白同源性最高,分別為100%、95.3%、95.3%與94.8%,并具有較近的系統(tǒng)進(jìn)化距離。利用qRT-PCR檢測VaCBL01基因在不同組織器官的表達(dá)量及響應(yīng)脫落酸(abscisic acid, ABA)與低溫脅迫的表達(dá)模式,結(jié)果顯示,該基因?yàn)榻M成型表達(dá),但在卷須中表達(dá)相對較高;其表達(dá)與ABA和低溫脅迫有關(guān)。同時(shí),通過酵母雙雜交互作分析研究發(fā)現(xiàn),19個(gè)山葡萄VaCIPKs均無自毒性和自激活活性,并且山葡萄VaCBL01與VaCIPKs蛋白之間的相互作用的特異性和強(qiáng)度不同。VaCBL01與12個(gè)CIPKs (VaCIPK01, 02, 04, 06, 09,10, 11, 12, 13, 16, 17和18)有強(qiáng)烈的互作;與另外5個(gè)CIPKs (VaCIPK03, 07, 15, 19和20)互作強(qiáng)度較弱,但與2個(gè)CIPKs (VaCIPK08和14)沒有任何互作作用。本研究結(jié)果為深入開展葡萄CBL-CIPK信號網(wǎng)絡(luò)功能研究提供了基礎(chǔ)資料。