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摘要：為篩選和驗(yàn)證遼寧絨山羊粗型和細(xì)型個(gè)體羊絨細(xì)度相關(guān)候選基因ALX4、NT-3、POLD2和AKT1表達(dá)調(diào)控潛在靶標(biāo)miRNAs及其表達(dá)差異,提取遼寧絨山羊細(xì)型和粗型皮膚組織DNA和RNA,先采集遼寧絨山羊粗型和細(xì)型肩胛部皮膚組織,根據(jù)NCBI上的序列克隆獲得ALX4、NT-3、POLD2和AKT1基因的3'UTR,利用Primer5.0設(shè)計(jì)并合成功能引物,通過(guò)常規(guī)PCR擴(kuò)增ALX4、NT-3、POLD2和AKT1基因的3'UTR序列,在miRBase數(shù)據(jù)庫(kù)中,篩選羊絨細(xì)度候選靶基因3'UTR靶標(biāo)miRNAs,然后與遼寧絨山羊(LCG)和內(nèi)蒙古絨山羊(MCG)品種間皮膚miRNAs高通量測(cè)序結(jié)果共聚焦,篩選和驗(yàn)證羊絨細(xì)度相關(guān)候選基因表達(dá)調(diào)控潛在靶標(biāo)miRNAs,在NCBI中檢索到miRNAs的前體序列,應(yīng)用RNAfold獲得二級(jí)結(jié)構(gòu)圖及勢(shì)能圖,通過(guò)qPCR驗(yàn)證細(xì)型遼寧絨山羊(FinetypeLCG)和粗型遼寧絨山羊(CoarsetypeLCG)皮膚組織中羊絨細(xì)度候選基因ALX4、NT-3、POLD2和AKT1靶標(biāo)miRNAs的表達(dá)量。結(jié)果表明:通過(guò)miRBase數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè),羊絨細(xì)度候選基因ALX4、NT-3、POLD2和AKT1分別獲得104,27,19和32個(gè)靶標(biāo)miRNAs,與絨山羊品種間皮膚miRNAs高通量測(cè)序結(jié)果聚焦分析,ALX4基因聚焦到3個(gè)靶標(biāo)miR-m13,miR-433-5p和miR-671,其表達(dá)量是56,2和27;NT-3基因聚焦到1個(gè)靶標(biāo)miR-1296,表達(dá)量是41;POLD2基因聚焦到1個(gè)靶標(biāo)miR-130b,表達(dá)量是177;AKT1基因聚焦到2個(gè)靶標(biāo)miR-345-3p和miR-2331-3p,其表達(dá)量是52和5。其中前體序列的二級(jí)結(jié)構(gòu)表明miR-2331-3p的結(jié)構(gòu)最不穩(wěn)定,miR-1296最小自由能的絕對(duì)值最大,結(jié)構(gòu)最為穩(wěn)定。用qPCR驗(yàn)證miR-m13,miR-433-5p,miR-671,miR-1296,miR-345-3p和miR-2331-3p在遼寧絨山羊細(xì)型皮膚中的表達(dá)量都顯著高于粗型皮膚中的表達(dá)量,可能對(duì)羊絨細(xì)度候選基因發(fā)揮重要的正調(diào)控作用,而miR-130b在LCG粗型的表達(dá)量高于LCG細(xì)型表達(dá)量,可能miR-130b對(duì)羊絨細(xì)度相關(guān)候選基因起負(fù)調(diào)控作用。