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轉染白細胞介素1受體拮抗劑與轉化生長因子β1軟骨細胞和致炎軟骨塊共培養后炎性因子的變化

作者:張平; 劉斌; 蔡道章; 鐘志宏; 潘永謙; 張振山 廣州醫學院第三附屬醫院骨外科; 510150; 中山大學附屬第三醫院骨外科

摘要:目的 觀察重組人白細胞介素1受體拮抗劑(IL-1Ra)和轉化生長因子β1(TGF-β1)雙基因在體外對兔骨關節炎(OA)的治療效果.方法 取新西蘭大白兔關節軟骨經酶消化分離原代培養軟骨細胞,并采用特異性細胞外基質Ⅱ型膠原免疫細胞染色進行鑒定.軟骨細胞分為轉染IL-1Ra組(A組)、轉染TGF-β1組(B組)、轉染IL-1Ra+TGF-β1雙基因組(C組)、未轉染組(D組)、空白組(E組).A、B、C 3組均以LipofectamineTM 2000 Reagent脂質體為轉染媒介.各組加入軟骨塊與軟骨細胞共培養,除E組外,其余各組均加入20 ng IL-1β,轉染共培養后分別在12、24 h、2、4、6 d通過熒光顯微鏡觀察軟骨細胞轉基因的表達.于共培養第2,4、6天后應用放射免疫分析(RIA)分別檢測各組IL-1β和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量.結果 成功分離培養軟骨細胞,Ⅱ型膠原免疫細胞染色顯示細胞胞質染成棕黃色.胞核基本不著色.熒光顯微鏡下A、B、C組均有綠色熒光蛋白的表達,轉染后24 h,3組細胞的轉染率最高分別為(16.16+2.71)%、(16.54±2.91)%、(17.20±2.39)%,第2天后隨時間的延長轉染率逐漸降低.同時間點IL-1β水平D組>B組>A組>C組>E組;而第2、6天TNF-α水平D組>A組>B組>C組>E組,第4天E組>A組>B組>C組>D組,其中A組雖然略高于B組,但差異沒有統計學意義,其余各組間差異均有統計學意義.A、B、C組的IL-1β和TNF-α在第6天的水平明顯低于第2、4天,D、E組IL-1β水平不隨時間的延長而改變,TNF-α水平D組在第4天時最低,E組則最高.結論 轉染IL-1Ra和TGF-β1基因均有降低炎性因子水平的作用.聯合應用轉染IL-1Ra和TGF-β1基因可能控制炎性反應,為體外OA的基因治療提供實驗基礎.

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中華生物醫學工程雜志

中華生物醫學工程雜志, 雙月刊,本刊重視學術導向,堅持科學性、學術性、先進性、創新性,刊載內容涉及的欄目:編者導讀、專論、論著、新技術研發、生物技術、綜述、專題講座等。于1995年經新聞總署批準的正規刊物。

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